1. Utilisez des filtres en ligne
Le filtre en ligne est placé entre l'échantillonneur automatique et la colonne chromatographique (ou colonne de garde). Les filtres en ligne courants sont divisés en filtres en ligne en acier inoxydable avec fritte remplaçable (0.5 μm ou 0.2 μm) et PEEK jetable. Pour les filtres en ligne constitués de différents matériaux, il faut généralement choisir une plaque tamis avec une ouverture plus petite que la plaque frittée de la colonne, afin d'intercepter efficacement les particules susceptibles de bloquer la plaque frittée de la colonne chromatographique. Une fois qu'il est constaté que la pression de l'instrument commence à augmenter, il est possible que la fritte du filtre en ligne commence à se boucher et nous devons la mettre à jour avant qu'elle ne se bouche complètement.
Les filtres en ligne fonctionnent comme des membranes, mais ne nécessitent aucun travail supplémentaire. Après centrifugation de l'échantillon, il est toujours possible qu'une petite quantité de particules pénètre dans l'instrument, et les particules résiduelles peuvent être interceptées par le filtre en ligne situé devant la colonne chromatographique. De plus, l'avantage du filtre en ligne est qu'il est simple et facile à remplacer. Généralement, il ne faut que 5 minutes pour le remplacer, et il peut être redémarré pour être utilisé, et il n'a pas besoin de passer du temps à se réajuster ou à se calibrer. Un autre avantage est que le filtre en ligne peut également filtrer les particules générées par l'usure due au vieillissement de certaines pièces de l'instrument. Je préconise fortement que chaque instrument à phase liquide soit équipé d'un filtre en ligne. Même si une colonne de garde est utilisée, je recommande également d'installer un filtre en ligne avant la colonne de garde.
2. Utilisez la colonne de garde
Une colonne de garde est une courte colonne chromatographique installée devant la colonne chromatographique. Il mesure généralement 1-2 cm de long, et le garnissage est adapté au garnissage de la colonne utilisée, et la taille des pores de la fritte utilisée n'est pas supérieure à celle de la fritte utilisée dans la colonne. La colonne de garde a deux fonctions : (1) elle peut bloquer les particules susceptibles de bloquer la colonne ; (2) étant donné que la colonne de garde et le garnissage de la colonne sont appariés, toutes les impuretés chimiques susceptibles d'interagir de manière irréversible avec le garnissage de la colonne sans pic seront capturées en premier par la colonne de garde.
L'utilisation d'une colonne de garde peut certainement prolonger la durée de vie de la colonne. Cependant, avant d'envisager l'utilisation d'une colonne de garde, il est recommandé d'évaluer les points suivants :
(1) La précolonne n'est pas bon marché, alors demandez-vous si le coût d'achat de la précolonne peut être compensé par l'augmentation de la durée de vie de la colonne ;
(2) Quelle est la durée de vie de la colonne de garde ? Il faut faire attention au moment où la cartouche de garde doit être remplacée, afin de ne pas contaminer la colonne chromatographique car le remplacement est trop tard ;
(3) Comment rincer la colonne de garde ? Lors du rinçage, la colonne de garde et la colonne chromatographique doivent être lavées séparément pour éviter de rincer les impuretés accumulées dans la colonne de garde dans la colonne chromatographique ;
(4) Ne vous attendez pas à augmenter l'efficacité de la colonne en raison de l'ajout d'une colonne de garde de 1-2 cm. Bien que l'installation d'une colonne de garde soit similaire à l'augmentation de la longueur de la colonne, l'utilisation d'une colonne de garde ajoute également deux connecteurs et des tuyaux de raccordement, ce qui réduira l'efficacité de la colonne du système d'instruments, il serait donc bon que l'efficacité de la colonne sans garde colonne pourrait être maintenue.
Inutile de dire que l'utilisation de colonnes de garde peut certainement prolonger la durée de vie de la colonne, mais il est recommandé que chaque laboratoire évalue le besoin de colonnes de garde en termes d'économie et d'effort. Même avec une colonne de garde, je recommanderais de mettre un filtre en ligne entre la colonne de garde et l'échantillonneur automatique, après tout, le remplacement du filtre en ligne est moins cher que le remplacement de la colonne de garde et augmente la durée de vie de la colonne de garde et de la colonne .
3. Ne pas entrer d'échantillons non traités
Avec ou sans prétraitement, il est recommandé que tous les échantillons soient filtrés ou centrifugés avant l'injection. Par exemple, lorsque l'échantillon est filtré à travers une membrane filtrante pour éliminer les particules et réduire ainsi le colmatage de la fritte de la colonne chromatographique, la taille des pores de la membrane filtrante doit être inférieure à la taille des pores de la fritte de la colonne chromatographique. Généralement, les colonnes chromatographiques avec des particules supérieures à 3 μm utilisent une fritte de 2 μm, les colonnes chromatographiques avec des particules de 3 μm utilisent une fritte 0.5 μm et les colonnes avec des particules inférieures à 3 μm utilisent généralement 0.2 μm fritte, de sorte que les filtres généraux 0.45 μm peuvent être utilisés dans toutes les colonnes chromatographiques, à l'exception des particules sub-2 μm ; pour les colonnes avec des particules sub-2 μm, des filtres avec des pores 0.2 μm sont généralement utilisés. La plupart des membranes filtrantes sont préemballées et peuvent être directement connectées à une seringue pour la filtration ou utilisées comme plaque filtrante dans une 96-plaque à puits.