Les cinq principaux systèmes d'un chromatographe liquide sont les suivants :
1. Système d'injection
Généralement, un échantillonneur d'injection à diaphragme ou une salle d'injection à haute pression est utilisé pour terminer l'opération d'injection, et le volume d'injection est constant.
Ceci est bénéfique pour améliorer la reproductibilité des échantillons analytiques.
2. Système de perfusion
Le système se compose de trois parties : une pompe haute pression, un réservoir de phase mobile et un gradienteur. La pression générale d'une pompe haute pression est de 1,47 ~ 4,4 x 107 Pa et le débit est réglable et stable. Lorsque la phase mobile à haute pression traverse la colonne de chromatographie, elle peut réduire l'effet de diffusion de l'échantillon dans la colonne et accélérer sa vitesse de déplacement dans la colonne. Ceci est bénéfique pour améliorer la résolution, récupérer l’échantillon et maintenir l’activité biologique de l’échantillon. Les erreurs de stockage de la phase mobile et les gradienteurs peuvent modifier la phase mobile en fonction des propriétés de la phase stationnaire et de l'échantillon, notamment en modifiant la polarité de l'éluant, la force des ions, la valeur du pH ou en passant à d'autres méthodes.
3. Système de séparation
Le système comprend des colonnes de chromatographie, des tubes de connexion et des thermostats.
La longueur d'une colonne chromatographique est généralement de 10-50 cm (si deux sont nécessaires en combinaison, un tube de connexion peut être ajouté entre les deux), avec un diamètre intérieur de 2-5 mm. Il est fabriqué en acier inoxydable de haute qualité, en tube de verre à paroi épaisse, en alliage de titane et d'autres matériaux. La colonne est équipée d'un diamètre de 5-10 μ. Une phase fixe de granulométrie m (composée de matrice et de liquide fixe), dans laquelle la matrice est composée de résine à haute résistance mécanique ou de gel de silice, tous deux ont les caractéristiques d'inertie (telles que l'élimination basique des gènes de silicate à la surface du gel de silice), de porosité et de grande surface spécifique. De plus, sa surface est revêtue mécaniquement (similaire à la préparation de phases stationnaires en chromatographie en phase gazeuse) ou chimiquement couplé à divers gènes (tels que des groupes phosphate, amine quaternaire, hydroxyméthyle, phényle, amino ou alkyle de chaînes carbonées de différentes longueurs) ou à des ligands.
Par conséquent, ces types de substances ayant des structures relatives fixes différentes ont une bonne sélectivité. Par exemple, en couplant de la lectine de pois (PSA) à la surface d’un gel de silice poreux, une glycoprotéine peut être isolée des fibroblastes. De plus, le plasmide en phase stationnaire est petit et le lit de la colonne permet d'obtenir facilement un état uniforme et dense, ce qui peut réduire considérablement l'effet de diffusion par courants de Foucault. La matrice a une petite taille de particules et des micropores peu profonds, et l'échantillon présente un court transfert de masse dans la zone microporeuse. Ceux-ci sont bénéfiques pour réduire la bande passante et améliorer la résolution. Selon l'analyse de la théorie de l'efficacité de la colonne, plus la taille des particules de la matrice est petite, plus le nombre théorique N du plateau est grand.
4. Système de détection
Il existe trois détecteurs couramment utilisés pour la chromatographie liquide : le détecteur UV, le détecteur à indice de réfraction différentiel et le détecteur à fluorescence.
Détecteur UV
Ce détecteur convient à la détection d'échantillons ayant des performances d'absorption de la lumière ultraviolette (ou lumière visible).
Ses caractéristiques : une large gamme d'applications (telles que les protéines, les acides nucléiques, les acides aminés, les nucléotides, les peptides, les hormones, etc. peuvent être utilisés) ; Haute sensibilité (limite de détection de 10-10g/mL) ; Large plage linéaire ; Insensible aux changements de température et de débit ; Peut détecter des échantillons élués par une solution à gradient.
5. Système de traitement des données
Ce système peut collecter, stocker, afficher, imprimer et traiter les données de test, permettant la séparation, la préparation ou l'identification correcte des échantillons.
En résumé, le chromatographe liquide se compose d'un système d'échantillonnage, d'un système de perfusion, d'un système de séparation, d'un système de détection et d'un système de traitement de données. La combinaison de ces systèmes rend l’expérience plus fiable et plus stable.